以前检测病毒常用的方法是,利用生物体及其细胞进行培养、分离,然后用显微镜观察。一般需要1~2周的时间,这种方法无法用于POCT(即时检测)。
现在,面向POCT的病毒检测方法利用的检测原理主要有两种(图1)。一种是抗原抗体反应,另一种是利用DNA和RNA的互补性的方法。
图1:病毒检测方法大致有两种
流感病毒的检测方法大致可以分为两种。一种是通过抗原抗体反应筛选并固定病毒表面的一种蛋白质、然后通过荧光标记等检验的方法。另一种是扩增RNA进行检测的方法。目前最常用的是利用抗原抗体反应的免疫层析法,不过这种方法的灵敏度较低,正在开发可实现高灵敏度的方法。
抗原抗体反应是指,生物体特定的蛋白质(抗体)与主要来自外部的细菌和病毒的特定蛋白质(抗原)像钥匙和锁一样相互选择结合的反应。利用该原理,可以从血液等混合有多种物质和细胞的溶液中只分离特定的病毒。通过为抗体添加荧光色素等标识、然后照射紫外光等,就能通过荧光的强度来推断有无病毒和病毒数量。
这种方法中最常见的是免疫层析法。不过,由于这种方法不进行培养和扩增,所以存在灵敏度低、样本中的病毒较少时无法检测出病毒的课题。而基于电子技术的检测技术是大幅提高灵敏度的有力候补之一。
另一种利用DNA互补性的检测方法是基本直接利用细胞分裂,或病毒等在细胞内的繁殖的方法。DNA由两条单链构成,每一条单链是下一条新链的“模板”。把想要检验的DNA或RNA的模板与特定的合成酶和作为样本的DNA片段等加在一起,以模板为基础,可大量复制DNA或RNA。其代表性的方法是PCR法。最近出现的利用DNA分析技术的POCT的进展,主要取决于PCR法的进展。
不过,这种方法有一个缺点,那就是DNA在复制时或多或少会出现些错误,即会发生基因突变。DNA和RNA的扩增数量越多,这种错误也越多。因此,在想要了解准确的DNA碱基序列时,就要使用不进行扩增就能检测DNA的技术。这样,电子技术就有了用武之地。
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