分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律:当容液中的物质在光的照射和激发下,产生了对光吸收的效应。但物质对光的吸收是有选择性的,各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。所以根据定律当一束单色光通过一定浓度范围的稀有色溶液时,溶液对光的吸收程度A与溶液的浓度c(g/l)或液层厚度b(cm)成正比。其定律表达式A=abc
(a是比例系数)。当c的单位为mol/l时,比例系数用ε表示,则A=εbc称为摩尔吸光系数。其单位为L·mol-1·cm-1它是有色物质在一定波长下的特征常数。
T(透光率)=I/I0A(吸光度)=-lgT或A=K·C·L(比色皿的厚度)测定时,入射光I,吸光系数和溶液的光径长度不变时,透过光是根据溶液的浓度而变化的,即“K”为常数。比色皿厚度一定,“L”、“I0”也一定。只要测出A即可算出“C”。
722分光光度计规格和主要技术参数
722可见分光光度计的构成
仪器主要由光源,单色器,样品室,检测器,信号处理器和显示器组成。
722可见分光光度计按键说明
〈模式〉键 :工作方式切换键,液晶屏上依次显示〔T〕(透射比),〔A〕(吸光度),〔C〕(浓度),〔F〕(计算因子)。
〈100%T〉/〈 〉 键 :在T模式时为调满度键,在A模式时为调吸光度为零键。测试样品前,样品室放入参比样品,按此键,T模式显示[T100.0%],A模式显示 [A 0.000]。该键在C模式或F模式时,在输入相应参数时起加1的作用。
〈0%T〉/〈 〉 键 :在T模式时为调零键,样品室放入黑体,按此键显示[ T 0.0%]。该键在C模式或F模式时,在输入相应参数时起减1的作用。
〈打印〉/〈确认〉 键 :输入参数时的确认键,完成测量后,通过RS232串口,可通过外接打印机打印当前值。
722型分光光度计的使用步骤
1、将灵敏度旋钮调至“1”档(信号放大倍率最小)。
2、开启电源,指示灯亮,选择开关置于“T”,波长调至到测试用波长。仪器预热20分钟。
3、打开试样室(光门自动关闭),调节透光率零点旋钮,使数字显示为000.0。(调节100%T旋钮),盖上试样室盖,将比色皿
架处于蒸馏水校正位置,使光电管受光,调节透光率100%旋钮使数字显示100.0。如显示不到100.0,则可适当增加微电流放大的倍数。(增加灵敏度的档数同时应重复(3)调节仪器透光率的“0”位)但尽量使倍率置于低档使用。这样仪器会有更高的稳定性。
4、预热后,按(3)连续几次调整透光率的“0”位和“100%”的位置,待稳定后仪器可进行测定工作。
722分光光度计注意事项
1、该仪器应放在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的工作台上,室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风,防止灯泡灯丝发亮不稳定。
2、使用本仪器前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理,以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前,应该对仪器的安全性能进行检查,电源接线应牢固,通电也要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再按通电源开关。
3、在仪器尚未接通电源时,电表指针必须于“0”刻线上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝进行调节。
722型分光光度计维护方法
1、在不使用时不要开光源灯。如灯泡发黑(钨灯)、亮度明显减弱或不稳定,应及时更换新灯。更换后要调节好灯丝位置。不要用手直接接触窗口或灯泡,避免油污沾附,若不小心接触过,要用无水乙醇擦拭。
2、单色器是仪器的核心部分,装在密封的盒内,一般不宜拆开。要经常更换单色器盒的干燥剂,防止色散元件受潮生霉。仪器停用期间,应在样品室和塑料仪器罩内放置数袋防潮硅胶,以免灯室受潮,反射镜面有霉点及沾污。
3、吸收池在使用后应立即洗净,为防止其光学窗面被擦伤,必须用擦镜纸或柔软的棉织物擦去水分。生物样品、胶体或其它在池窗上形成薄膜的物质要用适当的溶剂洗涤。有色物质污染,可用3mol/L 盐酸和等体积乙醇的混合液洗涤。
4、光电器件应避免强光照射或受潮积尘。
5、仪器的工作电源一般允许220V±10%的电压波动。为保持光源灯和检测系统的稳定性,在电源电压波动较大的实验室最好配备稳压器。
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