分光光度计是用不连续的波长采样反射物体或透射物体的一种测量仪器。由于不同物体分子的结构不同,对不同波长光线的吸收能力也不同,因此,每种物体都具有特定的吸收光谱。能从含有各种波长的混合光中,将每一种单色光分离出来,并测量其强度的仪器叫做分光光度计。
分光光度法是比色法的发展。比色法只限于在可见光区,分光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。分光光度法则要求近于真正单色光,其光谱带宽最大不超过3-5nm,在紫外区可到1nm以下,来自棱镜或光栅,具有较高的精度。分光光度计?就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。分光光度计可分为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。
分光光度计组成
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。
分光光度计特点
独特的双光路、双光束光学系统,仪器分辨率更高,杂散光更低,稳定性、可靠性更强,分析更加准确;
采用320*240位点阵式高亮6 ”液晶显示器,显示清晰,信息完备;
独特的长光程光路设计,使仪器分辨率更高,尤其适合微量测试 强大的数据处理功能,使测试结果能得到充分的应用,用户编辑更为简单快捷;
采用悬架式光学系统设计,整体光路独立固定在16mm厚的铝制无变形基座上,底板的变形和外界的震动对光学系统不产生任何影响,从而大大提高了仪器的稳定性和可靠性;
采用同步正弦机构,波长准确度高,重复性好;
采用ARM系统;
0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0六档光谱带宽自动可选,满足不同用户的测量需求;
24位高速、高精度A/D转换,仪器精度更高、反应速度更快;
主要元件采用进口配置,使仪器杂散光更低、稳定性、可靠性更强;
功能更加强大,主机可独立完成光度测量、定量测量、光谱扫描、动力学、DNA/蛋白质测试,多波长测试及数据打印等功能;
充分考虑不同用户的使用习惯,本系列仪器都标配元析公司光谱扫描软件,联机操作时,除能实现主机的所有测试功能外,还可实现更为强大的数据处理功能,并且使数据存储达到无限。
分光光度计原理
分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,其关系如下式:
A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式中:A为吸光度;
I0为入射的单色光强度;
I为透射的单色光强度;
T为物质的透射率;k为摩尔吸收系数;
L为被分析物质的光程,即比色皿的边长;
c为物质的浓度;
物质对光的选择性吸收波长,以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多,且常使用单色光纯度较差的仪器,故测定时应用标准品或对照品同时操作。
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